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請(qing)收好(hao)這份抗(kang)體保(bao)存指南!

很多小伙伴在收到抗(kang)體後(hou),不(bu)知道該如何正確保(bao)存抗(kang)體產品(pin)?為什麼有的(de)產品(pin)要保(bao)存在-20°,有的(de)卻要放在4°冰箱?不(bu)同(tong)類(lei)型抗(kang)體儲存時候是否有差(cha)異?本篇(pian)將重點解答(da)以上疑問,請(qing)保(bao)存好(hao)這份abcam抗(kang)體保(bao)存指南,以便于以後(hou)查詢。

一、保(bao)存溫度

  • 對于我們(men)的(de)許多抗(kang)體而言,分(fen)裝為小等份(推(tui)薦每(mei)份體積為 10 μL)在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍(dong)存是最佳(jia)的(de)保(bao)存條件。分(fen)裝抗(kang)體可以最大(da)限度減少(shao)凍(dong)融對抗(kang)體造成的(de)損壞,還可避免多次從同(tong)一管中移取(qu)抗(kang)體而引(yin)入污染(ran)。分(fen)裝後(hou)抗(kang)體只可凍(dong)融一次,如有剩余,應保(bao)存在 4 ℃ 下。

  • 收到抗(kang)體後(hou),請(qing)以 10,000 × g 離心 20 秒沉降滯留在管蓋螺紋中的(de)溶液hai) 緩hou)分(fen)裝抗(kang)體並將其轉移至低蛋白(bai)質結合的(de)微量離心管中。分(fen)裝抗(kang)體的(de)量取(qu)決于您(nin)在實驗中常用的(de)量。分(fen)裝抗(kang)體應不(bu)少(shao)于 10 μL;huan)fen)裝抗(kang)體量越少(shao),濃度ran)馱餃菀資shou)到蒸發以yue)按 嫜pin)管表(biao)面吸(xi)附的(de)影(ying)響。

  • 在大(da)部(bu)分(fen)情況下,可在收到抗(kang)體之後(hou)立即將其保(bao)存于 4 ℃ 下,可保(bao)存 1 至 2 周。具體產品(pin)還請(qing)遵循(xun)數據(ju)表(biao)上的(de)保(bao)存建議,這一點非常重要!

 

二、特例

  • 切勿(wu)凍(dong)存黴偶聯的(de)抗(kang)體,而應將其保(bao)存在 4 ℃ 下。凍(dong)融不(bu)僅會影(ying)響抗(kang)體的(de)結合能(neng)力,還會降低黴活(huo)性。

  • 偶聯抗(kang)體(無論是偶聯有熒光染(ran)料xi) 富故巧wu)素(su))應保(bao)存在深色樣品(pin)瓶中或用錫箔紙(zhi)包裹樣品(pin)瓶。暴露于光下會影(ying)響偶聯物(wu)的(de)活(huo)性。熒光偶聯物(wu)尤其容易發生光致漂白(bai),因此在實驗各階(jie)段都應避光保(bao)存。

  • IgG3 同(tong)型抗(kang)體的(de)獨特之處在于其解凍(dong)後(hou)容易形成聚集(ji)體,因此應始(shi)終保(bao)存在 4 ℃ 下。

  • 腹水液中可能(neng)含(han)有蛋白(bai)黴,因此收到後(hou)應盡快(kuai)凍(dong)存。

三、污染(ran)

  • 為了防止(zhi)微生物(wu)污染(ran),可將疊氮化(hua)鈉加入抗(kang)體制備物(wu)中xiao)  hua)鈉的(de)最終濃度為 0.02% (w/v)。我們(men)的(de)多款抗(kang)體中都含(han)有這種保(bao)護(hu)劑,其濃度範圍為 0.02%-0.05%。每(mei)個抗(kang)體產品(pin)數據(ju)表(biao)的(de)保(bao)存緩沖(chong)液部(bu)分(fen)將對此進行說明。

 

四、不(bu)使用疊氮化(hua)鈉的(de)情況

  • 如果(guo)要用mei)kang)體對活(huo)細胞進行染(ran)色或處理,或者要用mei)kang)體進行體內研(yan)究,請(qing)務(wu)必使用不(bu)含(han)疊氮化(hua)鈉的(de)制備物(wu)。這種抗(kang)菌劑對大(da)部(bu)分(fen)生物(wu)體都有毒(du)害(hai)作用︰它會阻斷(duan)細胞色素(su)電子傳遞系統(tong)。

  • 疊氮化(hua)鈉會干(gan)擾(rao)涉及胺基的(de)所有xin)劑 fan)應,因此必須(xu)在進行xin)劑 fan)應之前將其去(qu)除。完成偶聯反(fan)應之後(hou),可使用疊氮化(hua)鈉保(bao)存抗(kang)體。另(ling)一種可用的(de)抗(kang)菌劑是 0.01% 硫柳汞鈉(硫柳汞),這種物(wu)質不(bu)含(han)伯胺。

  • 抗(kang)體溶液中的(de)疊氮化(hua)鈉可通(tong)過滲析或凝膠過濾去(qu)除。IgG 的(de)分(fen)子量為 150,000 Da(IgM 約(yue)為 600,000 Da),疊氮化(hua)鈉的(de)分(fen)子量為 65 Da。截留分(fen)子量為 14,000 Da 的(de)微滲析裝置mei)墑溝 hua)物(wu)順利擴散出去(qu),而抗(kang)體得以保(bao)留。

  • 滲析過程在燒(shao)杯(bei)中xiao)ㄖ糜詿帕 漣杵魃希 露缺bao)持 4 ℃)進行xiao) mei)毫升抗(kang)體使用至少(shao) 1 升預冷(ling)的(de) PBS,攪拌滲析裝置 6 小時。更(geng)換 PBS 兩次,每(mei)次更(geng)換後(hou)均攪拌至少(shao) 6 小時。如有可能(neng),所有材(cai)料都應滅菌,並且(qie)應在無菌條件下處理所得制備物(wu)。

五、凍(dong)融損壞

  • 反(fan)復凍(dong)融可能(neng)使抗(kang)體變性,導致抗(kang)體形成聚集(ji)體,從而降低tui)浣岷夏neng)力。所以抗(kang)體產品(pin)務(wu)必要避免反(fan)復凍(dong)融。

  • 對大(da)部(bu)分(fen)抗(kang)體而言,在 -20 ℃ 下保(bao)存就已足夠;在 -80 ℃ 下保(bao)存並無明顯優勢(shi)。應避免使用無霜冰箱,因為此類(lei)冰箱的(de)凍(dong)融循(xun)環(huan)(用于減少(shao)霜的(de)形成)正是保(bao)存此類(lei)抗(kang)體需要避免的(de)。出于相(xiang)同(tong)的(de)原因,應將抗(kang)體樣品(pin)瓶放在冰箱中溫度波動最小的(de)區域,例如抵靠冰箱背(bei)板(ban)放置而不(bu)是置于冰箱門架(jia)上xi)/p>

  • 有些研(yan)究人員向抗(kang)體中加入冷(ling)凍(dong)保(bao)護(hu)劑甘(gan)油(最終濃度為 50%)以防止(zhi)凍(dong)融損壞;甘(gan)油可將冷(ling)凝點降至 -20 ℃ 以下。雖然這種方(fang)法可用于多種抗(kang)體,但我們(men)僅對少(shao)數幾種 Abcam 抗(kang)體在這種保(bao)存條件下的(de)穩定性進行了測(ce)試,我們(men)僅擔保(bao)遵循(xun)數據(ju)表(biao)建議進行保(bao)存的(de)抗(kang)體的(de)性能(neng)。我們(men)不(bu)建議在 -80 ℃ 下保(bao)存含(han)甘(gan)油的(de)溶液hai) 蛭 夢露鵲陀詬gan)油的(de)冷(ling)凝點。請(qing)注意,甘(gan)油可能(neng)會被細菌污染(ran)。如果(guo)加入了甘(gan)油或任何冷(ling)凍(dong)保(bao)護(hu)劑,應當(dang)小心操作,確保(bao)獲得無菌制備物(wu)。

  •  

六、蛋白(bai)質和穩定劑

  • 將抗(kang)體稀(xi)釋至工作濃度後(hou),在 4 ℃ 下保(bao)存不(bu)得超(chao)過一天。一般而言,以高濃度保(bao)存的(de)蛋白(bai)質更(geng)不(bu)易降解,理想濃度是 1 mg/mL 或更(geng)高。這就是將蛋白(bai)質(如 BSA)作為穩定劑加入抗(kang)體溶液的(de)基本原理。加入的(de)蛋白(bai)質還能(neng)盡可能(neng)減少(shao)抗(kang)體結合到容器壁(bi)上造成的(de)損失。請(qing)勿(wu)向將要進行xin)劑 de)抗(kang)體中加入蛋白(bai)質穩定劑,因為蛋白(bai)質穩定劑會與(yu)抗(kang)體競爭(zheng),降低偶聯效率。

 

 

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